试剂盒组成原理:本试剂盒采用双抗体夹心法检测抗原。
1.用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入标本或标准品、HRP标记的亲和素,再与HRP标记的亲和素标记的亲和素与亲和素标记的抗原或抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。
颜色的深浅和样品中的标本呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心30分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5. 保存:如有颗粒或细胞损坏,应将其分成小部分-70 °C保存,避免反复冷冻。
尽可能的不要使用溶血或高血脂血。
如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。
不要在37°C或更高的温度加热解冻。
应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
标本应在室温下解冻并保证样品均匀地充分解冻。
避免使用溶血或高血脂血。
2. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20°C保存,但应避免反复冻融。
3. 不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,然后再加待测样品 10µl(样品zui终稀释度为 5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻