一步克隆试剂盒的详细介绍1.抗体包被:即用自己批号(80mL)的抗体包被微孔板中,制成固相载体,往包被单抗的微孔中依次加入100、200、500 μl 固相载体,再与HRP标记的抗体结合,形成固相抗原-抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。
颜色的深浅和样品中的物品呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中抗体浓度。
一步克隆法测定抗原:用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗原,往包被单抗的微孔中依次加入100、200、1000 μl 固相抗原,再与HRP标记的抗体结合,形成固相抗原-抗体复合物复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。
一步克隆板由底物TMB显色。
一步克隆板由底物A、B各组成,各组分中加入50微升体积的洗涤缓冲液,加终止液终止反应。
一步克隆的结束可分为多波长: 450 μl(活络、稳定、稳定) 多波长: 250 μl (稳定、有色) 载体表面的抗原决定簇(zui常用的包被物) 集齐后,称之为抗体,在某些化学用语中均将此抗原或抗体与该抗体符号,称为“一步克隆”。
多读取所需的板条数。
一步克隆板条一般由软板、软板、板条、底物A、B各组分组成。
每孔参加150 μl 洗涤缓冲液后,加入显色剂A、B,并在微孔中充分洗涤。
(不同波长孔可以洗去不同层子,不同试剂盒可以洗去不同的试剂盒,不一样批号试剂不同批号)。
一步克隆板条加样:加样即用,将特异性的抗原与不符号的抗体同时存在,亲和素标记的抗原与固相抗体同时存在,洗涤步骤就需求有微孔板*孔和*孔的*孔。
一步克隆板可以直接用于检测抗原,也可用于检测抗体。
一步克隆板包含以下步骤:(1)按试剂瓶标签说明书进行选择所需板条数,每批进口/国产产品。
(2)根据需求选择适宜的产品盒,如需求,可挑选1瓶。
(3)加入40ul的生物素标记的DNA或DNA,可适当增加DNA的浓度。
(4)小瓶从冰箱中取出的克隆品需在室温下放置4-6小时后方可使用。
(5)剩余