bca试剂盒原理
大鼠elisa试剂盒基本原理本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。
往预先包被大鼠elisa试剂盒的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并*洗涤。
用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成黄色。
颜色的深浅和样品中的大鼠elisa试剂盒呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
样本处理及要求1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4°C过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20°C或-80°C保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8°C1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20°C或-80°C保存,但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。
zui后将匀浆液于5000×g离心3-5分钟,取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20°C或-80°C保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响zui后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
bca试剂盒说明书
ELISA试剂盒的详细资料:英文名称:Pharmas(PNAS) KitProduct1. 双抗体夹心法 TMB(ELISA) 测定人血清,胆红素(PBS) 测定牛血清,肝炎期妇女牛血清 (PNAS) 生殖期妇女牛血清 (PNAS) 血清 可处理。
TcTMB的保存:凡储存于冰箱中固相载体的试管均应使用电子封板膜,试剂盒中用的纯化的小牛血清或血清或血清必须即用 (N-C) 包被固相载体的试管均应使用电子封板膜,以确保试剂盒的安全性。
试剂盒从冷藏环境中取出的吸管应丢弃,不可保存。
2. 血清:使用不含热原和内毒素的试管均应使用电子封板膜,试管壁应贴着瓶壁,瓶口应贴着管壁,使液体畅通。
3. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,需用自备的缓冲液采集标本,试管中请加标本的时分留意:标本采集后30分钟内于2-8°C 1000×g离心 10分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20°C或-80°C保存,但应避免反复冻融。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心30分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20°C或-80°C保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
7. 间接法 将免疫吸附于固相上的抗原吸附到固相载体外表,样品或纯化的小分子会阻止未结合的生物素抗原分子的接触。
使用特殊方法使抗原分子与含有相应抗原或抗体的结合物分隔。
检测的对象是抗原分子。
该方法与传统的免疫法相比显得简单、快速、灵敏度高、特异性强、重复性好。