小鼠白介素elisa试剂盒
小鼠白介素elisa试剂盒(酶联免疫法)实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白介素elisa试剂盒水平。
用纯化的小鼠白介素elisa试剂盒抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入小鼠白介素elisa试剂盒,再与HRP标记的实验标本偶联成抗体-抗原-酶标抗体,经过*洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。
颜色的深浅和样品中的小鼠白介素elisa试剂盒呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠白介素elisa试剂盒浓度。
标本收集、处理及保存方法1. 血清-----使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测,3000转离心30分钟取上清。
3. 保存------如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存在-20°C,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
标本收集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20°C保存,但应避免反复冻融,不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测,3000转离心30分钟取上清。
操作步骤1. 标准品的稀释:份12孔配置不同批号的标准品50μl,配置48孔板保存。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品zui终稀释度为 5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
10.终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。
测定应在加终止液后15
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