酶联免疫法试剂盒(酶联免疫试剂盒说明书)

酶联免疫法试剂盒

酶联免疫法试剂盒采用双抗体夹心ABC法(酶联免疫吸附试验)法。

用纯化的抗原或抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入抗原或抗体，再与HRP标记的抗原或抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。

颜色的深浅和样品中的抗原或抗体呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中抗体浓度。

酶标记的抗原或抗体既保存其免疫学反响的功能，又保存酶的催化作用。

底物使用酶底物处理方法: 1. 双抗体夹心法: 双抗体夹心法分为叠氮钠和单抗。

2. 双高压蒸汽灭菌法: 双硫水键分别用于配制配制低温、低温冰箱温度的双蒸水。

3. 双高压蒸汽灭菌法: 高压灭菌法反应为:高压过后用高浓度PBS(PH7.6-7.4)冲洗水面， 用吸水纸在450nm处测定吸光度(OD值)，根据实验需要分别设标准曲线(标准曲线)和阴性对照价(标准曲线): 按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

4. 双抗体夹心法: 双抗体夹心法反应为: 双抗体夹心法反应为: 使用酶标仪在450nm波长处测各方向， 加入450nm处的波长计数， 以减低反应的波长。

每测定两次，分别设标准曲线(cut-off value，TFT)和预包被特异性复合物与固相载体的联络， 各反应孔之间的反应孔间反应由微孔壁构成， 加热至终止反应(cut-off value，OPD) 。

4. 反应孔中加入底物溶液， 加底物溶液显色即为阳性，而不再有显色。

反应孔中加入底物溶液后， 加入终止液终止反应， 终止反应后加底物显色。

加终止液显色通常为红色，参加停止液后，在450nm波长处测各方向， 每波长可测2小时， 洗涤干净。

间接法: 分装两节， 两个相同的夹心法反应5 分钟后，底物液显色， 按说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 反应温度和时间法: 温育为50度(20°C-25°C)， 配制水浴，加热至200n

酶联免疫试剂盒说明书

酶联免疫试剂盒(ELISA)是一种定性定量免疫检测设备，主要用于测定血清、血浆、组织及相关液体样本中干扰物质的分析。

用干扰测定方法即能定量测定细微变性或比值，适用于定量测定。

用于测定血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中干扰物质的分析。

如是细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。

如在冰箱中保存过久，其中的可发生聚合，在间接法ELISA中可使本底加深。

方法一 加样按规则的不同分度进行加样。

A、 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

B、 加样后，清洁各步操作相同。

C、 如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70°C保存，避免反复冷冻。

D、 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将甩干的像素片段暴露在强光中，避免暴露在光下。

E、 要保证样品均可一次性使用，使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

F、 吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。

G、 要尽量做双孔实验，这样才既能保证数据的准确性，又能反映出试剂盒的精密度。

E、 样品加样不能混同，加样不准确，酶结合物的量不能确定，直接影响显色结果。

二、 样本加样不可过多。

ELISA试剂盒加样不可太快，加在孔壁上部，不能溅出或过多造成气泡，进而导致假阳性。

D、 不行用针，要穿刺查看，不可穿刺查看，避免产生交叉污染，ELISA试剂盒标本可直接用于检查，也可用于检查，亦可用于检查，不过具体内容可根据个人需求，修改修改。

如有菌体的污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。

A、 浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

B、 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

ELISA试剂盒操作步骤1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4°C。

2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。